非洲猪瘟（ASF）是影响猪最重要的经济疾病之一，由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起。目前国内还没有安全的商品化疫苗和特效的治疗方法，主要通过生物安全措施和基于精准诊断的早期识别进行预防和控制。
瑞典国家兽医研究所Marek Walczak团队对不同毒力ASFV毒株 PCR检测的三种采样方式（血液、口腔拭子、肛门拭子）进行了系统性评估，冠牧精准诊断学习后对内容进行了整理，希望能为广大养殖朋友在非瘟防控过程中提供帮助。
研究发现：
1、低毒力毒株通过PCR检测，易造成漏检，结合抗体检测能提高检出率；
2、不同毒力毒株，在不同样本类型中的载量存在差异，其中血液样本载量相对更高。
一、试验动物分组情况
本研究设计了3组试验动物，其中T1组接种非洲猪瘟Ⅱ型的高毒力毒株Arm07/CBM/c2，T2组接种非洲猪瘟Ⅱ型的中/高毒力毒株Pol18_28298_O111，T3组接种低毒力毒株NH/P68。
表1 实验动物数量、非洲猪瘟毒株特征、感染途径和剂量的描述
二、低毒力毒株感染猪只拥有更高的抗体滴度，同时不同样本类型中均表现高Ct值
在感染强毒毒株（T1和T2）的动物中，血液、直肠和口腔拭子之间的病毒载量存在显著差异，血液中的平均Ct值显著低于直肠和口腔拭子。感染弱毒株（T3）的所有基质Ct值都在36-38之间，但抗体滴度要大于T1和T2，且T3低毒力组的抗体反应约是T1（高毒性）和T2组（中/高毒性）的10倍。
表2 不同样本中的非洲猪瘟PCR方法和抗体检测情况
注：“*”表明采样时间为安乐死当天（T3）或动物死亡前的最后一次抽血。
三、低毒力毒株感染组可长期存活
下图是试验过程中各组动物的存活率，T1高毒力组最长存活期8天，T2中/高独立组最长存活期21天，T3 低毒力组至试验周期结束均存活。
图1 各组试验动物存活率（“*”表明在28天进行安乐死）
四、低毒力毒株感染的猪只偶尔发热，大多检测不到病毒血症
不同毒株或感染途径引起的病毒排毒模式不同。强毒毒株感染后症状要明显强于弱毒株，且除T3弱毒株感染外，其他组几乎所有的血液样本的平均潜伏期都比口腔和直肠拭子短，非侵入性采样可能不能及时地检出阳性，存在一定风险。
T1和T2中，在病毒血症检测后不久就可检测到发热。而在T3中，低毒力株感染，猪只偶尔发热，而大多检测不到病毒血症。
表3 发热及不同基质首次检测PCR阳性情况
在强毒株中，从病毒血症的第一天到动物死亡，均可检测到非洲猪瘟病毒 DNA，而在感染弱毒毒株的动物中，血液中大多检测不到病毒DNA。
图2 动物试验中不同基质中病毒DNA的排毒模式
五、血液样本在不同毒力毒株中均表现出更高的检出率
在整个实验期间的相同采样时间点，PCR阳性的血液样本达到的百分比（从11.1%到68.8%不等）高于口腔和直肠拭子的PCR阳性样本（分别为6.3-37.5%和4.8-37.5%），在T3弱毒力组中，各样本类型PCR阳性的检出率整体最低。上述实验结果说明强毒毒株的阳性率要高于弱毒株，血液样本的检出率要高于其他样本类型。
表4 在整个试验期间的实验中收集的PCR阳性样品的百分比
冠牧学习心得
参考资料：
Walczak M, Szczotka-Bochniarz A, Żmudzki J, Juszkiewicz M, Szymankiewicz K, Niemczuk K, Pérez-Núñez D, Liu L, Revilla Y. Non-Invasive Sampling in the Aspect of African Swine Fever Detection-A Risk to Accurate Diagnosis. Viruses. 2022 Aug 11;14(8):1756.
