最后编辑日期：2025 年 6 月 26 日，星期四
基因表达分析简介
基因表达分析是了解基因如何在不同的生物系统中发挥作用并进行调控的基础。 原位杂交 (ISH) 是一种强大的技术，它使研究人员能够直接在组织样品或整个组织（整胚）内可视化特定核酸序列的空间和时间表达模式。 科研人员可以使用 ISH 检测 DNA 和 RNA 序列，从而深入了解特定基因的活跃位置和时间。 使用 RNA 探针，尤其是反义 RNA 探针，已成为原位杂交的首选方法，这要归功于其对靶 RNA 序列的高灵敏度和特异性。 该方法广泛用于发育生物学、疾病病理学等领域的基因表达研究，了解基因活性定位对这些领域是至关重要的。
第 1 阶段 - 样品储存
正确储存组织样本对于保留核酸并确保可靠的原位杂交实验结果至关重要。 为了防止 RNA 降解，应小心处理组织样本，并在抑制 RNase 活性的条件下储存。 常见方法包括收集后立即在液氮中闪冻样品，或将其固定在福尔马林中，然后进行石蜡包埋（即福尔马林固定石蜡包埋，FFPE）。 FFPE 组织特别适合 ISH，因为它们可以长期储存，而不会显著丧失 RNA 完整性。 无论采用何种方法，都应将组织样本保存在阴凉干燥的环境中，避免反复冻融循环，以保持核酸的质量，从而进行下游分析。
组织制备和切片
组织样本的制备和切片是原位杂交实验方案中的必要步骤。 使用多聚甲醛或福尔马林等试剂进行恰当固定可保持组织的结构和核酸的完整性，使其易于与探针杂交。 组织固定后通常包埋在石蜡中，以便用薄片切片机进行切成薄片，从而产生可封片在玻片上用于 ISH 分析的组织切片。 对于某些应用，例如研究斑马鱼胚胎中的基因表达，使用全胚胎 ISH，从而使研究人员能在不切片的情况下分析整个组织或生物体。 精心制备组织可确保目标核酸序列保持完整，并且可用于与 RNA 或 DNA 探针进行特异性杂交。
