自 2013 年外泌体相关研究者摘得诺贝尔生理或医学奖，外泌体研究便持续成为国自然热点，中标项目占比连年走高。2022 年，外泌体中标项目数跻身国自然热点前五；2023 年，其中标数依旧高位盘踞，国自然资助金额超 2 亿 。
外泌体究竟有何独特魅力？一起来探索：
外泌体概览
外泌体（Exosomes）是直径约 40 - 160nm 的小泡结构，由细胞经外胞吞作用释放至胞外环境。从血液、尿液，到唾液、乳汁，乃至体外培养细胞的上清液，几乎各类生物体液中都有它们的身影 。外泌体可携带蛋白质、脂质、RNA、DNA 等多种生物分子，在免疫调控、组织修复、遗传信息传递等生理过程里，扮演着重要 "信使" 角色。
外泌体研究聚焦方向
近年外泌体研究项目，聚焦以下领域：
1. 功能机制探究
外泌体作为细胞间通讯的 "载体"，与疾病发生发展深度关联。挖掘其生物学功能与作用机制，对解码疾病进程意义重大。当前，机制研究多聚焦肿瘤、心血管、神经、免疫四大方向，试图解析外泌体在疾病起源、进展中的分子逻辑 。
2. 工程化外泌体开发
通过修饰、改造外泌体，让其适配临床需求，比如赋予靶向递送药物的能力，成为精准医疗新路径。经工程化设计后，外泌体可突破生物屏障，定向将治疗分子输送至病变位点，为难治愈疾病提供新策略 。
3. 体外诊断标志物挖掘
凭借体液中广泛存在的特性，外泌体成为非侵入性疾病诊断的 "潜力股"。在癌症、心血管病、神经退行性疾病等领域，外泌体作为生物标志物，已展现出早期诊断的巨大价值，有望革新疾病筛查与诊断模式 。
下面为大家梳理外泌体研究中提取→鉴定→标记→保存这一经典实验思路，助力开启外泌体探索之旅 。
提取
外泌体研究的起始关键步骤，是从样本里提取外泌体。当下存在多种提取手段，不过每种方法都有其优势与不足，实际操作时，常需搭配组合不同方法，以此获取高纯度、高浓度的外泌体 。
外泌体鉴定
完成外泌体提取后，需开展鉴定工作。国际细胞外囊泡学会发布的指导手册，从以下三个核心维度对鉴定流程进行规范，为外泌体研究提供权威指引：
一、TEM 形态鉴定
外泌体的典型特征是具备双层囊泡结构，普通光学显微镜因分辨率限制无法识别。透射电镜（TEM） 可直接观察外泌体的形态、结构完整性，凭借对囊泡超微结构的精准呈现，成为外泌体形态鉴定的 "金标准" 。
二、NTA 理化特性检测
尽管 TEM 能直观呈现外泌体形态，但无法全面覆盖样本中所有囊泡的大小与浓度信息。纳米颗粒追踪分析（NTA） 可快速测定外泌体的粒径分布与浓度，通过动态追踪纳米颗粒布朗运动，量化反映群体特征，是外泌体理化特性鉴定的关键指标 。
三、WB 标志蛋白验证
除形态与理化特性，外泌体的标志蛋白检测同样重要。常用标志物涵盖两类：一是跨膜蛋白（如 CD63、CD9、CD81 ），二是膜结合 / 游离蛋白（如 TSG101、Alix、HSP70 ）。实验中需至少检测 2 种标志蛋白 ，最经典组合为 CD63 与 TSG101 ，通过免疫印迹（WB）验证蛋白表达，进一步锚定外泌体身份 。
四、文献实践案例
在探究心外膜脂肪来源细胞外囊泡（eFat-EVs）参与房颤（AF）发病机制的研究中，通过超速离心分离 AF 患者与非 AF 患者的 eFat-EVs 后，依次开展：
三、CFSE 标记技术在体外泌体示踪中的应用
CFSE（羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯）作为跨膜荧光探针，凭借其膜渗透性与绿色荧光特性（Ex/Em=492/517nm），成为外泌体体外示踪的常用工具。其标记机制为：CFSE 进入外泌体后，被酯酶水解生成带负电荷的荧光分子，从而保留在囊泡内实现稳定标记。
